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植物类胡萝卜素含量测定试剂盒

阅读次数：1052  发布时间：2026/1/30 16:50:48

植物类胡萝l、素含量测定试剂盒说明书一（货号：WS8710W 微板法96样）、 产品简介：类胡萝卡素（Carotenoids） 是一类重要的天然 色素的总称，普遍存在于动物 、高等植物、真菌、 藻类的黄色、 橙红色或红色的色素之中， 类胡萝卡素是体内维生素A的前体， 同时还具有抗氧化、免疫调节、抗癌、 减轻心血管疾病及着色剂等作用。类胡萝卡素在440nm 处具有特殊吸收峰，样本经溶剂提取后在此波长下可检测其 含量 。含叶绿体的组织样本， 需排除叶绿素a和叶绿素b对类胡萝卡素的干扰， 根据经验公式计算出叶绿素a和叶绿素b的含量，再进一步得出类胡萝卡素的含量：不含叶绿素的组织可以直接根据类胡萝卡素的经验消光系数进行计算。二、 试剂盒组分与配制：试剂名称规格保存要求备注提取液 A120mL×l瓶4。C保存有挥发性， 用完后提取液B60mL×l瓶4。C保存立即盖紧盖子。试剂一粉剂×l瓶4。C保存抽提Buffer配制：（体积比）临用前可按照提取液A：提取；在B=2:l混匀备用。二、 所需的仪器和用品：酶标仪、96孔UV板、 天平、锡宿纸。四、 植物类胡萝｜、素含量的测定：建议正式实验前选取2个样本做预测定，了解本批样晶和实验流程，避免样本和试剂浪费！1、 样本制备：Cl）取新鲜植物叶片或其它绿色组织用蒸馆水洗干净， 吸干表面水分， 去掉中脉。(2）称约O.lg组织（若是含水量低样本或近乎干样，可适当减少取样质量如0 02g），然后加入l.SmL抽提Buffer， 少量试剂一〈约20mg）， 务必在黑暗或弱光条件下充分研磨（难磨叶片可以添加少量石英砂助磨）， 然后全部转移至2mL的EP管。注：a提取液即抽提Buffer有挥发性， 若研磨后体积变少， 可用提取液中｜、足至l.5rr止。b若用研钵进行提取，建议可分次加入研磨如用lmL抽提Buffer研磨，剩余的0.SmL来冲洗研钵。(3）置于黑暗条件下或者包上锡宿纸浸提出， 观察试管底部组织残渣完全变自则提取完全（中间可间隔5-IOmin颠倒混合几下，促进提取完全〉，若组织残渣未完全变白，继续浸提 （如可延长半个小时的浸提时间〉至其完全变白。【洼】l若上层浸提液有残渣， 可常温下8000r/min离心5min， 再取上清液检测。2浸提液易挥发，叶绿素降解等因素均会影晌测定结果， 所以提取完成后， 尽快测定可降低干扰。2、 上机检测：A、黄色或真他非绿色组织（不含叶绿体）的类胡萝｜、素测定步骤：①酶标仪预热30min以上， 调节波长至440nm。②在96孔板中依次加入：试剂名称测定管空白管（仅做一次〉澄清浸提液200抽提Buffer200迅速于440nm处吸光值A, 6.A=A测定管，A空白管。I注】：l若A测定值大于1.5，可用抽提Buffer稀释浸提液再测定，则稀释倍数D带入公式计算。2若A测定值小于0.05，可减少抽提Buffer的量即V，或增加取样质量W，则改变后的V本试剂盒仅供科研使用和W需带入公式重新计算。B、 新鲜植物叶片或其他绿色组织（含叶绿体）的类胡萝l、素测定步骤：①酶标仪预热30min以上， 调节波长至下面检测所需波长。②在96孔板中依次加入：试剂名称测定管空白管（仅做一次〉澄清浸提液200抽提Buffer200迅速测定，分别于665nm和649nm和470nm处读取吸光值A,6A饰＝（A测定－A空白）邸，6A 649=(A测定－A空白）倒， 6A41o=(A测定－A空白）470。【注】：l若A测定值大于l ，可用抽提Buffer稀释浸提液再测定，则稀释倍数D带入公式计算。2若A测定值小于0.05，可减少抽提Buffer的量即V，或增加取样质量W，则改变后的V和W需带入公式重新计算。五、 结果计算：A、 黄色或真他非绿色组织（不含叶绿体）的类胡萝｜、素含量计算公式：类胡萝卡素含量（?glg)=[6A-c-（?×d）×VI］÷（W×VI÷V）×1000×D=l2×6A÷W×DV一提取液即抽提Buffer体积，l.5mL;W一样本质量，goV l…检测时浸提液取样体积，200?L=0.2mL=0.2xI 0-3 L;D一稀释倍数，未稀释即为I:E…公认的类胡萝卡素经验吸收系数，250L/g /cm;d…光径，0元m;B、 新鲜植物叶片或其他绿色组织（含叶绿体）的类胡萝｜、素含量计算公式：Ca(mg/L)=(l3.95×6A“5-6.88×6A649)-;-d=27.9×6A“s-13.76×6A649:Cb(mg/L)=(24.96×6A64「7.32×6A邸）÷d=49.92×6A64「14.64×6A66s:类胡萝卡素浓度：Cc(mg/L )=( I 000×6A470叶之05×Ca- l 14.8xCb)-c-245=8. J6x6A410-23.247×6A649+6.6 l 8×6A66s:类胡萝卡素含量Cmglg鲜重） =Cc×V 1000×D,.wV一提取液即抽提Buffer体积，1.5mL:D…稀释倍数，未稀释即为l： 原创作者：上海瓦兰生物科技有限公司

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