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慢病毒感染快速指南 1. 将目的细胞按 30%汇合度接种到 24 孔板,约 3-5×104细胞数/孔,不同细胞因为细胞大 小不同细胞数量会不同,快速指南以细胞数量为 5×104为例,加入 500uL 完全培养基进行 细胞培养。 2. 接种后 12-20h 感染阴性对照慢病毒(接种细胞至病毒感染细胞时间不宜太长,否则细胞 增殖影响细胞密度不利用后期抗性筛选)。 3.加病毒量计算方法:(细胞数×MOI 值/病毒滴度)×103=病毒量(uL),加病毒量见下表。 同时加入 Polybrene,每孔加 0.25uL,浓度为 10mg/mL Polybrene,细胞培养液中终浓度为 5ug/mL。 病毒液滴度 (TU/mL) MOI=10 (uL) MOI=20 (uL) MOI=40 (uL) MOI=80 (uL) MOI=100 (uL) 4×108TU/mL 1.25uL 2.5uL 5uL 10uL 12.5ul 4.感染 16-20h 后更换培养基,弃去培养基,每孔加入 500uL 新鲜的培养基。 5.感染后 48-96h 显微镜观察荧光。(注:如果 48h-96h 期间细胞汇合度达到 100%,请及时 传代培养) 6.建议将 48 孔板细胞进行传代,传代 12 孔板,后继续观察荧光,根据细胞状态和荧光细 胞比例综合判断细胞感染佳 MOI 值。一般选择细胞生长良好,感染效率 80%左右的感染 条件作为佳感染条件。(注:100%荧光感染不一定为细胞佳 MOI 值,因为可能会造成 细胞慢病毒感染拷贝数太高,影响细胞状态) 更新时间:2023/12/22 16:13:04 标签:MIF慢病毒含myc标签 |