本试剂盒仅供科研使用
甘油三酯（triglyceride, TG）含量测定试剂盒说明书 （货号：WS0190W微板法96样） 一、产品简介： 甘油三酯（TG）是三分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子，不仅是细胞膜的主要成 分，也是重要呼吸底物。 甘油三酯（TG）被脂蛋白脂肪酶水解为甘油和游离脂肪酸。甘油接着被甘油激酶(GK) 的催化生成甘油-1-磷酸(G-1-P)。G-1-P被甘油磷酸氧化酶(GPO)氧化生成过氧化氢 (H2O2)，(H2O2)与4-氨基氨替吡啉等反应生成红色醌类化合物，其在510nm处有特征吸 收峰，通过检测510nm处吸光值即可得出TG含量。 二、试剂盒的组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体100mL×1瓶 4℃保存 试剂一 粉剂mg×1支 4℃保存 用甩几下使试剂落入底部，再加 2.2mL蒸馏水，充分震荡溶解备用。 试剂二 液体10mL×1瓶 4℃保存 试剂三 粉剂mg×1支 -20℃保存用 甩几下使试剂落入底部，再 加 2.1mL 蒸馏水，充分震荡溶解备用 。 试剂四 液体6mL×1瓶 4℃保存 标准品 液体1mL×1支 4℃保存 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96孔板、可调式移液枪、水浴锅、离心机、研钵、蒸馏水。 四、甘油三酯（TG）含量测定： 建议正式实验选取2个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约0.1g组织样本加入研钵中，加入1mL提取液，在冰上进行匀浆，12000rpm，4℃ 或室温离心10min，取上清液待测。 【注】：若组织样本为高脂样本或部分为高脂样本，需用无水乙醇进行提取。 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）； 12000rpm 4℃或室温离心10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为500~1000：1的比例进行提取。 ③ 液体样本：澄清的液体样本直接测定，若浑浊则离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 酶标仪预热30min，调节波长到510 nm。 ② 所有试剂解冻至室温（25℃）。 ③ 在96孔板中依次加入：本试剂盒仅供科研使用 2 试剂名称（μL） 测定管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 标准品 20 样本 20 试剂一 20 20 20 试剂二 80 80 100 试剂三 20 20 20 试剂四 60 60 60 混匀，室温（25℃）避光孵育30min，于510nm读取各管A值。 【注】1.若测定管的A值大于0.3，则可将样本进行稀释（用提取液稀释）或减少样本加样量V1（如 减至10μL，则试剂二相应增加），稀释倍数D或样本量V1需代入计算公式重新计算。 2.若样本为血清，蛋黄（需用乙醇提取）等高TG样本，可把样本V1降为2.5μL，另用17.5μL 蒸馏水补齐，再按照上述加样表操作测定，则改变后的V1需带入公司计算。 3.若样本自身含有高的甘油背景值或者含有高的抗氧化物质（如VC等），需要增设一个样本 自身对照（即20μL+100μL试剂二+20μL试剂三+60μL试剂四，避光反应20min,510nm读 取吸光值A），测定管减去对照管，代入计算公式计算。 五、结果计算： 1、按样本质量计算： TG(μg/g重量)=(C标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷(W×V1÷V) ×D =500×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白) ÷W×D 2、按细胞数量计算： TG(μg/104cell)=(C标准×V2)×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷(500×V1÷V) ×D =(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白) ×D 3、液体中TG含量计算： TG(μg/mL)=(C标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷V1×D =500×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)×D TG(mmol/L)=(C标准×V2) ×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)÷V1÷Mr×D =0.782×(A 测定-A 空白)÷(A标准-A空白)×D C标准－－-标品浓度，0.5mg/mL=500μg/mL；Mr－－-甘油三酯分子量，639； V－－-提取液体积，1mL； V1－－-样本加入体积，0.02mL； V2－－-标准品加入体积，0.02mL； D－－-稀释倍数，未稀释即为1； 500－－-细胞数量； W－－-样本取样质量，g。
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