本试剂盒仅供科研使用 胃蛋白酶（Pepsin）试剂盒说明书 (货号：WS0121F 分光法 24 样) 一、产品简介： 胃蛋白酶（Pepsin）是一种消化性蛋白酶，由胃粘膜主细胞分泌，分解食物中蛋白质 成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别，慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症 状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。 胃蛋白酶可催化血红蛋白水解生成含酚的氨基酸，含酚的氨基酸与福林酚反应后显蓝 色；其颜色的深浅与胃蛋白酶活性呈正比。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存条件 备注 提取液 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 液体 5mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉体 mg×2 瓶 4℃保存 临用甩几下使粉体落入底部，每瓶 再加 13mL 蒸馏水溶解备用。 试剂三 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂四 液体 6mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉体 mg×1 支 4℃保存 临用加 2mL 提取液，再用蒸馏水 稀释10倍，即为0.05mg/mL 酪氨酸。 三、所需的仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、台式离心机、可调式移液器、天平、 研钵、冰和蒸馏水。 四、胃蛋白酶活性测定： 建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，进行冰浴匀浆。4℃×3500rpm 离心 5min，取 上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取 ② 液体样本：液体用提取液按照 1:1 的比例混合稀释后，4℃×3500rpm，离心 5min， 取上清液检测。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 680nm，蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温。 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管本试剂盒仅供科研使用 2 样本 100 100 试剂一 100 37℃孵育 5min 试剂二 500 500 37℃孵育 10min 试剂一 100 37℃孵育 5min 后，3000rpm 离心 5min，上清液待测。 ④ 显色反应，在 EP 管中： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 标准管 （仅做一次） 空白管 （仅做一次） 上清液 120 120 标准品 120 提取液 120 试剂三 600 600 600 600 试剂四 120 120 120 120 37℃孵育 20min 后（若浑浊则室温 3000rpm 离心 5min），全部澄清反应液 至 1mL 比色皿中，于 680nm 处测定，读取各管的吸光值 A。ΔA=A 测定 -A 对照（每个样本做一个自身对照）。 【注】1. 若ΔA 在零附近徘徊，可以延长反应时间 T（如 37℃孵育 10min 延长至 20min）或增加样本 量 V1（如增至 150μL，则试剂二相应减少），则改变后的反应时间 T 和样本量 V1 需代入计 算公式重新计算。 2. 若 A 测定值大于 2，可以减少样本量 V1（如减至 50μL，用提取液相应补充），则改变后的 样本量 V1 需代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、按样本蛋白浓度计算： 酶活定义：37℃每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位(U)。 胃蛋白酶（U/mg prot）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷ (V1×Cpr) ÷T =35×ΔA÷（A 标准-A 空白）÷Cpr 2、按样本鲜重计算： 酶活定义：37℃每 g 组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μg 酪氨酸为 1 个酶活单位(U)。 胃蛋白酶（U/g 鲜重）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷(W×V1÷V) ÷T =35×ΔA÷（A 标准-A 空白）÷W 3、液体 LAP 活力的计算: 酶活定义：37℃每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成1μg酪氨酸为1个酶活单位(U)。 胃蛋白酶（U/mL）=[ΔA÷（A 标准-A 空白）×C 标准×V2]÷V1×2÷T =70×ΔA÷（A 标准-A 空白） V－－-加入提取液体积，1 mL； V1－－-加入样本体积，0.1mL； V2－－-第③歩反应总体积，0.7mL； T－－-反应时间，10min； C 标准－－-50μg/mL； W－－-样本质量，g； Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒； 更新时间：2023/12/13 10:10:35
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