| 本试剂盒仅供科研使用 蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）试剂盒说明书 （货号：WS3150F 分光法 24 样） 一、产品简介： 蔗糖是叶片等光合产物向各器官运输的主要形态。蔗糖合成酶（Sucrose Synthase, EC 2.4.1.13）是双向反应酶，既可催化蔗糖合成又可催化蔗糖分解，是蔗糖代谢的关键酶之 一。研究其分解方向 SS-Ⅰ的活性对于植物蔗糖降解以及淀粉合成具有重要意义。 SS-Ⅰ催化蔗糖和UDP生成游离果糖和UDPG，采用3,5－二硝基水杨酸法在540nm测定果 糖的含量来反映酶活性的高低。 二、试剂盒组成和配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 提取液 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂一 A：液体 2.2mL×1 支 B：粉体 mg×1 支 4℃保存 临用 A 液全部转移至 B 粉体 中，溶解待用，仍-20℃保存。 -20℃保存 试剂二 液体 1mL×1 支 4℃保存 试剂三 液体 5mL×1 瓶 4℃保存 标准品 粉剂 mg×1 支 4℃保存 若重新做标曲，则用到该试剂。 三、所需仪器和用品： 可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿（光径 1cm）、低温离心机、水浴锅、移液器、蒸馏水。 四、蔗糖合成酶（分解方向；SS-Ⅰ）活性检测： 建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 提取液，在 4ºC 或冰浴进行 匀浆(或使用各类常见电动匀浆器)。12000rpm ，4ºC 离心 10min，取上清作为待测样品。 【注意】 若样本含糖量高，可引起 A 对照值较大如超过 1.6，即检测背景值过高会影响检测，可在样本 制备过程中增加除糖步骤：取约 0.1g 组织（水分充足的样本可取 0.5g），加入 1mL 经预冷的 95%乙醇 冰浴匀浆，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀，向沉淀中加入经预冷的 80% 乙醇混匀，4℃放置 5min；12000rpm，4℃离心 5min；弃上清，留沉淀。再向沉淀中加入 1mL 经预冷 提取液涡旋混匀，4℃放置 10min；12000rpm，4℃离心 10min；留上清，弃沉淀。上清液置冰上待测。 ② 液体样本：直接测定。若浑浊，离心后取上清检测。 2、上机检测： ① 可见分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。 ② 所有试剂解冻至室温。 ③ 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 对照管 试剂一 80 蒸馏水 80 样本 20 20 37℃准确水浴 30min 后，95℃水浴 5min 试剂二 20 20 试剂三 100 100 95℃水浴 10min（可用封口膜缠紧，防止水份散失），本试剂盒仅供科研使用 2 取出后冰浴或淋浴至室温 蒸馏水 540 540 混匀，全部转移至 1mL 玻璃比色皿中，540nm 下测定各管吸光值。 ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管都需设一个对照管。 【注】：1. 若ΔA 值过小如在零附近徘徊，可增加样本的加样体积 V1（如 80μL，则蒸馏水相应减少） 或增加样本取样量 W（如增至 0.2g），或者延长 37℃水浴时间 T（如 40min 或更长），相 应的变量重新代入计算公式计算。 2. 若 A 测定的值大于 1.8，则可对加入比色皿的液体用蒸馏水稀释，则稀释倍数 D 需代 入计算公式计算。 五、结果计算： 1、标准曲线：y = 0.0111x - 0.0076；x 为标准品质量（μg），y 为ΔA。 2、按照蛋白浓度计算： 单位定义：每毫克组织蛋白每分钟催化产生 1 μg 果糖定义为一个酶活力单位。 SS-Ⅰ活性(μg /min/mg prot)=[(ΔA+0.0076) ÷0.0111]÷(V1×Cpr)÷T×D =150.2×(ΔA+0.0076) ÷Cpr×D 3、按照样本鲜重计算： 单位定义：每克组织每分钟催化产生 1 μg 果糖定义为一个酶活力单位。 SS-Ⅰ活性(μg /min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0076) ÷0.0111]÷(W×V1÷V)÷T×D =150.2×(ΔA+0.0076)÷W×D 4、按照液体体积计算： 单位定义：每毫升液体每分钟催化产生 1 μg 果糖定义为一个酶活力单位。 SS-Ⅰ活性(μg /min/mL)=[(ΔA+0.0076) ÷0.0111]÷V1÷T×D =150.2×(ΔA+0.0076)×D V－－-加入提取液体积，1 mL； V1－－-加入样本体积，0.02mL； T－－-反应时间，30 min； W－－-样本质量，g； D－－-稀释倍数，未稀释即为 1； Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的 BCA 蛋白含量检测试剂盒。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（10mg/mL）：向标准品 EP 管里面加入 1mL 蒸馏水（母液需在两天 内用且-20℃保存）。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 1, 2, 3, 4, 5. mg/mL。也可根据实际样本来 调整标准品浓度。 3 依据对照管加样表操作，根据结果即可制作标准曲线。 更新时间：2023/11/8 9:25:37
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