| 本试剂盒仅供科研使用 植物硝态氮试剂盒说明书 （货号：WS9040W 微板法 96 样） 一、产品简介： 硝态氮是植物主要的氮源。植物体内硝态氮含量反映了土壤中硝态氮的供应情况，可 作为土壤氮肥的指标。测定植物体内的硝态氮含量，不仅能够反映出植物的氮素营养情况， 而且对鉴定蔬菜和以植物为原料的加工制品的品质也有重要的意义。 在浓酸条件下，NO3-与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，硝基水杨酸在强碱条件下呈黄色， 该黄色物质在 410nm 处有大光吸收，通过比色测定进而计算得植物硝态氮含量。 二、试剂盒的组成和配制： 【 注】：粉剂量在 mg 别，使用用手甩几次或者进行离心，打开直接加入要求的试剂即可。 三、所需的仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、天平、常温离心机、水浴锅、可调式移液器、浓硫酸。 四、植物硝态氮含量测定： 建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验 样本和试剂浪费！ 1、样本制备： ① 组织样本： 称取约 0.1g，加入 1mL 蒸馏水，室温匀浆后，置于沸水浴中浸提 30min（期间不断晃 动），待冷却后于 25℃，12000rpm 离心 15min，取上清待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取 ② 细菌/细胞样本： 先收集细菌/细胞到离心管内，离心后弃上清；取 500 万细菌或细胞加入 1mL 蒸馏水； 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）， 置于沸水浴中浸提 30min（期间不断晃动），待冷却后于 25℃，12000rpm 离心 15min， 取上清待测。 [注]:若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例提取。 ③ 液体样本：直接检测；若浑浊，离心后取上清检测。 2、上机检测： 1 酶标仪预热 30min，调节波长至 410nm。 ② 在 EP 管中依次加入： 试剂名称（μL） 测定管 空白管（仅做一次） 样本 10 蒸馏水 10 试剂一 40 40 室温(25℃)反应 10min 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 粉剂×4 支 4℃保存 用甩几下或 4℃离心使试剂落入试管底部，每 支再加 1.3mL 浓硫酸充分溶解，4℃避光保存 1 周。 试剂二 液体100mL×1瓶 4℃保存 标准品 自备 若重新做标曲，则用到该试剂。本试剂盒仅供科研使用 2 试剂二 (沿着管壁务必缓慢加入) 950 950 混匀，取 200μL 于 96 孔板中，410nm 处读取吸光值 A， △A=A 测定管-A 空白管。 【注】试剂一和试剂二含有强酸强碱物质，需做好实验防护措施，谨慎操作！ 五、结果计算： 1、标准曲线方程：y = 0.4165x + 0.003；x 为标准品浓度（μg），y 为吸光值△A。 2、按样本质量计算： 硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/g 鲜重)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷(W×V1÷V) =240.1×(△A-0.003)÷W 3、按细胞数量计算： 硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/104 cell)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷(500×V1÷V) =0.48×(△A-0.003) 4、按照液体体积计算： 硝态氮(NO3 -N) 含量 (μg/mL)=[(△A-0.003)÷ 0.4165]÷V1=240.1×(△A-0.003) V－－-加入提取液体积，1mL； V1－－-样本的加样体积，10μL =0.01mL； 500－－-细胞数量，百万； W－－-样本质量，g。 附：标准曲线制作过程： 1 制备标准品母液（500μg/mL）：称量 3.61mg 的硝酸钾入 EP 管中，再加 1mL 蒸馏水 充分溶解（母液需在两天内用且-20℃保存）。 2 把母液稀释成六个浓度梯度的标准品：0, 40, 80, 120, 160, 200. μg/mL。也可根据实 际样本来调整标准品浓度。 3 依据测定管的加样顺序操作，根据结果即可制作标准曲线。 更新时间：2024/3/22 9:19:12
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