| 本试剂盒仅供科研使用 溶菌酶（LYS/LZM）检测试剂盒说明书 （货号：WS7021W 微板法 96 样） 一、产品简介： 溶菌酶又叫胞壁质酶或 N-乙酰胞壁质聚糖水解酶。能催化某些细菌细胞壁多糖的水解， 从而溶解这些细菌的细胞壁，起到杀死细菌的作用。 溶菌酶可使一定浓度的浑浊菌液降解，使浊度降低，透光度增加，可通过光度变化来测 定溶菌酶活性大小。 二、试剂盒组分与配制： 试剂名称 规格 保存要求 备注 试剂一 液体 30mL×1 瓶 4℃保存 试剂二 粉剂 mg×1 瓶 4℃干燥保存 临用甩几下使粉剂落入底 部，再加 22mL 试剂一涡旋 振荡，至全部溶解备用。 标准品 粉剂 mg×1 支 -20℃保存 三、所需仪器和用品： 酶标仪、96 孔板、可调式移液器、水浴锅/恒温培养箱、离心机、蒸馏水。 四、溶菌酶（LYS/LZM）活性检测： 建议正式实验选取 2 个样本做预测定，了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实 验样本和试剂浪费！ 1、 样本制备： ① 液体样本：澄清的液体直接检测，若浑浊则离心后取上清液检测。 ② 组织样本：取约 0.1g 组织，加入 1mL 生理盐水，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离 心 10min，取上清，置冰上待测。 【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取。 2、上机检测： ① 酶标仪预热 30min，设定温度 37℃，设定波长到 530nm。 ② 标准品制备：临用甩几下使粉剂落入底部，再加 1mL 蒸馏水充分溶解，再用蒸馏水 稀释 100 倍（即 1：99），终浓度为 200U/mL，即 10μg/mL。 ③ 所有试剂在 37℃条件下孵育 5min，在 96 孔板中依次加入： 试剂（μL） 测定管 标准管（仅做一次） 样本 20 标准品 20 试剂二 200 200 混匀，30s 于 530nm 读取吸光值 A1，2min30s 时再 读取 A2，△A=A1-A2。 【注】：1.加完试剂二反应即开始，若是批量检测，建议加完样本后，用排枪加试剂二，避本试剂盒仅供科研使用 2 免加样时间造成测定误差或者分批测定样本。 2.若 A2 的值小于 0.2，可对样本用蒸馏水稀释后再测定。稀释倍数 D 代入公式计算。 3.若测定管的△A 小于 0.005，可增加样本上清液体积 V2(如增至 50μL，则标准管多加 30μL 蒸馏水，保证两管总体积一致)，则改变后的 V2 代入计算公式重新计算。 五、结果计算： 1、按照体积计算： 溶菌酶含量(μg/mL)=C 标准×△A 测定管÷△A 标准管×D=10×△A 测定管÷△A 标准管×D 2、按样本鲜重计算： 溶菌酶含量(μg/g)=(C 标准×V1)×△A 测定管÷△A 标准管×D÷(W×V2÷V) =10×△A 测定管÷△A 标准管÷W×D 3、按样本蛋白浓度计算： 溶菌酶含量(μg/mg prot)=(C 标准×V1)×△A 测定管÷△A 标准管×D÷(Cpr×V2÷V) =10×△A 测定管÷△A 标准管÷Cpr×D C 标准－－-标品浓度，200U/mL，即 10μg/mL； V1－－-标准品加样体积，20μL=0.02mL； V2－－-样本加样体积，20μL=0.02mL； D－－-稀释倍数，未稀释即为 1； V －－-提取液，1mL； W－－-取样质量，g； Cpr－－-样本蛋白质浓度，mg/mL；建议使用本公司的蛋白含量测定试剂盒。 更新时间：2024/3/6 9:33:20
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